茶黄素（TF1）对人肝癌Bel-7402细胞的抑制作用及机制研究

王专，韦武均，任珍珍，何志龙，范玉纯，周洁，郭桂义，蒋利和,,*

茶黄素（TF1）对人肝癌Bel-7402细胞的抑制作用及机制研究

王专1，韦武均2，任珍珍2，何志龙1，范玉纯3，周洁3，郭桂义4，蒋利和1,2,3*

1. 广西大学轻工与食品工程学院，广西 南宁 530004；
2.右江民族医学院基础医学院，广西 百色 533000；
3.广西大学医学院，广西 南宁 530004；
4.信阳农林学院河南茶叶综合利用重点实验室，河南 信阳 464000

探究茶黄素（TF1）对人肝癌Bel-7402细胞的影响，并阐明其作用机制。通过CCK-8检测细胞活力，用平板克隆形成试验检测细胞增殖能力，细胞划痕愈合试验和Transwell小室法检测细胞迁移，用流式细胞术检测细胞凋亡，Western blot检测细胞凋亡相关蛋白（Bax、Bcl-2、PARP）、迁移相关蛋白（E-cad、N-cad、Vimentin、MMP9）和信号通路相关蛋白（TGF-、smad3、p-smad3）表达水平。结果表明，不同剂量TF1均可抑制Bel-7402细胞的增殖和迁移，促进其凋亡，并且存在剂量依赖性，剂量越大，抑制作用越强（<0.05）。与对照组相比，试验组Bax、E-cad蛋白表达水平较高，Bcl-2、PARP，N-cad、Vimentin、MMP9、TGF-、smad3、p-smad3表达水平较低（<0.05）。茶黄素可能通过TGF-信号通路抑制肝癌Bel-7402细胞的增殖、迁移，且促进其凋亡。

茶黄素；
人肝癌细胞；
机制研究

恶性肿瘤是医学研究领域的难题[1]，肝细胞癌（HCC）是世界上最常见的恶性肿瘤之一[2]。肝癌复发率和病死率高，已严重威胁着人类健康[3]。目前的治疗方案有手术切除、常规化疗等，但这些治疗方案有预后不良和耐药性等缺陷[4-5]。因此，识别具有潜在治疗效果的天然产物或新药物对治疗肝癌具有重要意义。

茶黄素类物质于1957年被Roberts[6]发现以来，迄今已在红茶中发现25种茶黄素组分，其中含量最多的是茶黄素（Theaflavin，TF1）、茶黄素-3-没食子酸酯（Theaflavin-3-gallate，TF2a）、茶黄素-3′-没食子酸酯（Theaflavin-3′- gallate，TF2b）和茶黄素双没食子酸酯（Theaflavin-3,3′-digallate，TF3）。茶黄素是红茶中的一种次生多酚，广泛存在于发酵茶中，具有抗菌、降脂、抗炎、抗突变和抗肿瘤作用，被认为是从茶中分离出来的“黄金分子”[7]。有研究报道，TF1对不同的肿瘤细胞具有抗肿瘤活性，包括乳腺癌[8]、前列腺癌[9]、肺癌[10]、结直肠癌[11]、卵巢癌[12]、宫颈癌[13]等。2006年，屠幼英等[14]报道了TFs对人肝癌Bel-7402细胞的生长有抑制作用。然而，TF1是否能抑制Bel-7402细胞的迁移并促进其凋亡，其作用机制尚不清楚。

因此，本研究将通过细胞试验，探讨TF1在体外对Bel-7402增殖、迁移和凋亡的影响，旨在明确这些过程的相关机制，为TF1抑制肝细胞癌的研究提供理论依据。

1.1 试验材料

TF1（纯度≥98%）购自成都普瑞法生物技术有限公司，CCK-8试剂盒购自美国MCE公司，E-cad、N-cad、Vimentin、MMP9、Bax、Bcl-2、-actin、PARP、TGF-1、smad3、p-smad3均购自affinity抗体公司，Trizol购自日本TaKaRa公司，流式凋亡试剂盒购自美国ATT公司，Hoechst33258购自上海碧云天生物技术有限公司。

1.2 试验方法

1.2.1 细胞培养

人肝癌Bel-7402细胞和正常肝细胞LO2购自中国科学院上海细胞所，在RPMI 1640培养基中添加10%胎牛血清、100 U·mL-1青霉素和100 mg·mL-1链霉素在37 ℃恒温培养箱中培养。

1.2.2 CCK-8试验检测细胞活力

将人肝癌Bel-7402细胞和正常肝细胞LO2以每孔5×104个细胞的密度接种于96孔板中，以浓度为120 μmol·L-1的顺铂作为阳性对照，用不同浓度（0、20、40、80、100、120 μmol·L-1）的TF1处理后，分别培养24、48、72 h。然后每孔加入CCK-8溶液10 μL，在37 ℃孵育1 h。最后，在450 nm处测定吸光度，并计算细胞活力。

细胞活力=（试验组/对照组）×100%。

1.2.3 流式细胞术和Hoechst33258检测细胞凋亡

将Bel-7402细胞接种于6孔板（每孔5×104个细胞）中，培养过夜。用不同浓度（0、50、100 μmol·L-1和150 μmol·L-1）的TF1处理24 h，使用不含EDTA的胰蛋白酶收集细胞，然后用AnnexinV/PI细胞凋亡检测试剂盒按照说明书进行细胞染色，用流式细胞仪检测。Hoechst33258染色则是将细胞用不同浓度（0、50、100 μmol·L-1和150 μmol·L-1）TF1处理24 h后，弃废液，用4%细胞固定液固定20 min，使用Hoechst33258染色15～20 min，最后用荧光显微镜观察细胞变化。

1.2.4 细胞划痕试验

将Bel-7402细胞接种于6孔板（每孔2×105个细胞）中，在37℃恒温培养箱中培养24 h，用移液管尖端刮伤单层细胞，用PBS洗涤1次。显微镜下拍照记录划痕宽度，加入含有不同浓度TF1（0、50、100 μmol·L-1和150 μmol·L-1）的无血清培养基，继续培养24 h，再次显微镜下记录划痕宽度，计算每组的迁移率。迁移率的计算计算公式为：迁移率=（迁移面积/划痕面积）×100%。

1.2.5 Transwell小室试验检测细胞的迁移

无血清培养基中的Bel-7402细胞接种到插入的过滤器中（每孔2×105个细胞）。用含血清的完全培养基作为诱导剂，用不同浓度（0、50、100 μmol·L-1和150 μmol·L-1）处理Bel-7402细胞。37 ℃孵育24 h后，弃去transwell小室中的培养液，用棉签擦去上层多余未迁移的细胞，并用PBS冲洗2次，用4%多聚甲醛和甲醇固定，结晶紫染色，显微镜下拍照观察。

1.2.6 转录组测序探索其潜在的作用机制

将Bel-7402细胞分成2组接种于6孔板（每孔5×105个细胞），待细胞贴壁且状态良好之后，对照组不做处理，试验组用浓度为100 μmol·L-1的TF1处理24 h，弃废液，用PBS清洗2次，用TRizol裂解细胞，提取总RNA。Bel-7402细胞的RNA序列，包含3个生物重复，由IlluminaNovaSeq测序系统（上海美吉生物技术公司）进行测序。采用R软件中的DESeq软件包进行差异基因表达分析，根据log|FC|≥1和调整后的<0.05认定为差异基因。

1.2.7 Western blot检测蛋白表达

取对数生长期的Bel-7402细胞，分别用不同浓度（0、50、100、150 μmol·L-1）的TF1处理Bel-7402细胞24 h。RIPA裂解缓冲液与蛋白酶抑制剂按照100∶1的体积比混合，在冰上裂解30 min，以12 000 r·min-1离心10 min，获得细胞总蛋白。采用BCA试剂盒（上海碧云天生物技术有限公司）测定蛋白浓度。蛋白质样品通过SDS-PAGE分离后转膜，再用新鲜的5%脱脂牛奶在室温下封闭2 h。将膜与一抗在推荐稀释比例下4 ℃孵育过夜。TBST洗膜3次，每次10 min，室温下进行二抗孵育2 h。采用增强型化学发光检测试剂（北京索莱宝科技有限公司）进行显影。

1.2.8 数据分析

2.1 TF1对人肝癌Bel-7402细胞和正常肝细胞LO2增殖的影响

CCK-8细胞毒性试验检测结果显示（图1A），随着TF1浓度的升高，Bel-7402细胞的增殖能力相应地降低，其中24 h的IC50为(101.057±5.648) μmol·L-1，48 h的IC50为(92.649±3.044) μmol·L-1，72 h的IC50为(70.614±8.586) μmol·L-1，结果表明，TF1能显著抑制Bel-7402细胞的增殖能力。TF1对人正常细胞LO2的检测结果表明（图1B），TF1对人正常肝细胞LO2的影响可以忽略不计。阳性对照顺铂对人肝癌Bel-7402细胞和正常肝细胞LO2的活力均具有较强的抑制作用，表明顺铂对人体可能具有较强副作用。

2.2 TF1对人肝癌Bel-7402细胞增殖能力的影响

图2结果显示，对照组人肝癌Bel-7402细胞增殖能力未受到影响，随着TF1浓度的增加，试验组Bel-7402克隆形成能力明显减弱，TF1浓度为30 μmol·L-1和45 μmol·L-1时，具有统计学意义（<0.05，<0.001）。

2.3 TF1对人肝癌Bel-7402细胞凋亡的影响

流式细胞分析结果显示（图3A），随着TF1浓度的增加，Bel-7402细胞出现不同程度的凋亡，并且呈浓度依赖性变化，表明TF1可以显著促进Bel-7402细胞的凋亡。Hoechst33258细胞染色结果显示，随着TF1浓度的加大，细胞核呈亮蓝色荧光越强，表明Bel-7402细胞凋亡数量越多（图3B）。Western blot结果显示，随着TF1浓度的升高，促凋亡蛋白Bax表达升高，抑制凋亡蛋白Bcl-2表达降低，DNA修复酶PARP蛋白表达降低（图3C）。

2.4 TF1对人肝癌Bel-7402细胞迁移的影响

细胞划痕试验结果显示（图4A），与对照组细胞相比，试验组迁移率降低（＜0.05），transwell细胞纵向迁移试验也得到了同样的结果（图4B）。Western blot结果显示，随着TF1浓度的升高，N-cad、MMP9和Vimentin蛋白表达降低，而E-cad蛋白表达升高（图4C）。

注：A，不同浓度的TF1对肝癌Bel-7402细胞活力的影响；
B，不同浓度的TF1对人正常肝细胞LO2活力的影响；
数据以表示，*代表P<0.05，**代表P<0.01，***代表P<0.001

注：数据以表示, *代表P<0.05，**代表P<0.01，***代表P<0.001

注：A，流式细胞术检测不同浓度TF1对人肝癌Bel-7402细胞凋亡的影响；
B，Hoechst 33258染色观察不同浓度TF1处理Bel-7402细胞后的凋亡形态；
C，Western blot检测不同浓度TF1处理Bel-7402细胞后凋亡相关蛋白的表达。数据以表示，*代表P<0.05，**代表P<0.01，***代表P<0.001

2.5 转录组测序揭示差异基因GO和KEGG富集结果

转录组测序结果显示（图5），对照组和试验组测序共得到156个差异基因，其中上调基因108个，下调基因48个。如图5A火山图所示，红色代表上调表达，蓝色代表下调表达。对差异基因进行GO功能注释和KEGG富集分析（图5B和图5C），GO富集主要包括生物过程（Biological process，BP），细胞组分（Cellular component，CC）和分子功能（Molecular function，MF）。BP富集结果显示，差异基因与细胞进程、生物调节和代谢进程等相关；
CC富集结果显示，主要与细胞组分和膜组分等相关；
MF分析结果显示，与细胞连接、催化活性、转运活性等相关。KEGG富集结果显示，主要与心肌细胞肾上腺素能信号传导，刺激神经组织中的交互，转化生长因子（TGF-）信号通路，调控干细胞多能性的信号通路等相关，由于TGF-信号通路是与肿瘤密切相关的信号通路，与细胞增殖、迁移、凋亡密切相关，因此对该信号通路进行了进一步地验证。

2.6 Western blot检测TGF-β通路部分蛋白变化

Western blot结果显示（图5D），随着TF1浓度的升高，TGF-1蛋白及其下游分子smad表达降低，证明其可能与此信号通路相关联。

肝癌作为危害健康程度较高的恶性肿瘤，复发率高，五年生存率较低，开发治疗效果更好的新化合物或药物迫在眉睫。目前，多种天然抗肿瘤药物在肿瘤治疗中已取得了明显的作用效果[15-16]，如姜黄素[17]、吉马酮[18]、芝麻素[19]、淫羊藿素[20]和褐藻多糖硫酸酯等[21]，可明显抑制肝癌细胞增殖和促进细胞凋亡。茶黄素在食品、卫生保健产品和天然药物等领域具有巨大的应用潜力和广阔的应用前景。茶黄素被报道具有多种药理功能与保健功效，如降血压、降血脂、抗氧化、抗肿瘤、保护骨骼健康等[22]。

图4 TF1对Bel-7402细胞迁移能力的影响

注：A，差异基因火山图；
B，差异表达基因GO功能注释分析结果；
C，差异表达基因KEGG通路富集结果；
D，TGF-β信号通路关键蛋白的表达水平。数据以表示，*代表P<0.05，**代表P<0.01，***代表P<0.001

本研究以肝癌Bel-7402细胞为研究对象，进行CCK-8细胞毒性试验。结果表明，在24、48、72 h的IC50分别为(101.057±5.648)、(92.649±3.044)、(70.614±8.586) μmol·L-1，呈现时间和浓度依赖性。平板克隆形成试验中，当TF1浓度为45 μmol·L-1时，细胞的增殖能力明显下降。细胞划痕试验中，当TF1浓度为150 μmol·L-1作用Bel-7402细胞24h后，相比对照组，细胞迁移率从32.12%下降为8.38%。流式细胞分析和Hoechst33258染色结果证明TF1浓度为150 μmol·L-1时，Bel-7402细胞早期凋亡数目增多，细胞凋亡率升高。Western blot结果显示，随着TF1浓度的升高，凋亡相关蛋白分子Bax表达升高，Bcl-2和PARP表达降低。迁移相关分子N-cad、MMP9和Vimentin表达降低，E-cad表达升高。转录组测序结果表明，试验组和对照组差异基因主要富集在TGF-这一信号通路。

TGF-/Smad信号通路在细胞分化、分裂和凋亡中起着重要作用，广泛参与多种恶性肿瘤的侵袭与转移进程[23]。TGF-1是多效的细胞因子，在肿瘤早期抑制肿瘤细胞生长、诱导凋亡，发挥抑癌作用，而在肿瘤晚期，发挥促癌作用。Smad家族蛋白是TGF-信号传导的重要细胞内转录效应子，在从细胞膜到细胞核的信号传导中起关键作用[24-28]。TGF-/Smad途径是在TGF-异常高表达之后，与其Ⅱ型受体在胞外结合并使Ⅰ型受体磷酸化，激活下游的Smad2/Smad3，从而诱导相关转录因子表达升高[29-30]。本研究揭示了TF1通过抑制TGF-/Smad信号通路，进而抑制肝癌Bel-7402细胞的增殖、迁移，作用机制可能是由于抑制TGF-1的激活和下调Smad3的磷酸化（图6）。

图6 TF1对人肝癌Bel-7402作用机制示意图

从对肝癌Bel-7402细胞的抑制效果来看，顺铂作为一种在临床广泛使用的化疗药物，其抗肿瘤作用较明显；
TF1作为天然产物，其杀伤肝癌Bel-7402细胞的能力也较强。但顺铂会对人体产生较大副作用，而TF1的副作用则可以忽略不计，对病人损伤小，可减轻病人痛苦。顺铂价格较为便宜，TF1价格相对昂贵。在未来的研究中，可以利用基因编辑技术或生物传感器以及现代分离纯化技术相结合实现大规模现代化工厂制备TF1，大大降低其提取成本，TF1将具有较好的发展前景。

综上所述，TF1可以显著抑制肝癌细胞Bel-7402细胞的增殖、迁移，且促进其凋亡，对正常肝细胞无影响。本研究将为茶黄素的后续研究提供理论基础。

本研究证实了TF1在人肝癌Bel-7402细胞中可以抑制其增殖、迁移，促进其凋亡。TF1浓度为45 μmol·L-1时，可显著抑制增殖；
浓度为150 μmol·L-1时，可显著抑制细胞迁移且促进细胞凋亡，证明了TF1可能通过TGF-信号通路来影响肝癌Bel-7402细胞的增殖、迁移和凋亡。然而，本研究只进行了体外细胞试验，需要进一步进行系统的动物试验和临床试验来验证TF1对Bel-7402细胞增殖抑制和诱导凋亡的体内作用。

[1] Zhang Z, Wang M, Xing S, et al. Flavonoids ofThunb. inhibit tumor proliferation and metastasis in human hepatocellular carcinoma HepG2 cells [J]. Food Science and Human Wellness, 2022, 11(2): 374-382.

[2] Yang J D, Hainaut P, Gores G J, et al. A global view of hepatocellular carcinoma: trends, risk, prevention and management [J]. Nature Reviews Gastroenterology & Hepatology, 2019, 16(10): 589-604.

[3] Chen W Q, Zheng R S, Baade P D, et al. Cancer statistics in China, 2015 [J]. CA: A Cancer Journal for Clinicians, 2016, 66(2): 115-132.

[4] Girardi D M, Pacífico J P M, Amorim F, et al. Immunotherapy and targeted therapy for hepatocellular carcinoma: a literature review and treatment perspectives [J]. Pharmaceuticals, 2020, 14(1): 28. doi: 10.3390/ph14010028.

[5] Himangshu S, Kirtikar S, Sumedha K, et al. Vialinin A, an edible mushroom-derived p-terphenyl antioxidant, prevents VEGF-induced neovascularization in vitro and in vivo [J]. Oxidative Medicine and Cellular Longevity, 2018: 1052102. doi: 10.1155/2018/1052102.

[6] Roberts E. The phenolic substances of manufactured tea. X.—the creaming down of tea liquors [J]. Journal of the Science of Food and Agriculture, 2010, 14(10): 700-705.

[7] He H F. Research progress on theaflavins: efficacy, formation, and preparation [J]. Food & Nutrition Research, 2017, 61(1): 1344521. doi: 10.1080/16546628.2017.1344521.

[8] Lakshmishri L, Baisakhi S, Juni C, et al. Theaflavins target Fas/caspase-8 and Akt/pBad pathways to induce apoptosis in p53-mutated human breast cancer cells [J]. Carcinogenesis, 2010, 31(2): 259-268.

[9] Sun S L, Pan S S, Miao A Q, et al. Active extracts of black tea () induce apoptosis of PC-3 prostate cancer cells via mitochondrial dysfunction [J]. Oncology Reports, 2013, 30(2): 763-772.

[10] Shi S, Ma B, Sun F, et al. Theaflavin binds to a druggable pocket of TMEM16A channel and inhibits lung adenocarcinoma cell viability [J]. Journal of Biological Chemistry, 2021: 101016. doi: 10.1016/j.jbc.2021.101016.

[11] Imran A, Butt M S, Xiao H, et al. Inhibitory effect of black tea () theaflavins and thearubigins against HCT 116 colon cancer cells and HT 460 lung cancer cells [J]. Journal of Food Biochemistry, 2019, 43(5): e12822. doi: 10.1111/jfbc.12822.

[12] Gao Y, Yin J F, Tu Y Y, et al. Theaflavin-3,3"-digallate suppresses human ovarian carcinoma OVCAR-3 cells by regulating the checkpoint kinase 2 and p27 kip1 pathways [J]. Molecules, 2019, 24(4): 673. doi: 10.3390/molecules24040673.

[13] Singh M, Singh R, Bhui K, et al. Tea polyphenols induce apoptosis through mitochondrial pathway and by inhibiting nuclear factor-kappaB and Akt activation in human cervical cancer cells [J]. Oncology Research Featuring Preclinical & Clinical Cancer Therapeutics, 2011, 19(6): 245-257.

[14] 屠幼英, 谢先吉. 茶黄素单体对三种癌细胞生长抑制研究[C]//浙江省科学技术协会. 浙江省生物化学与分子生物学学术交流会论文集. [出版地不详]: [出版者不详], 2005: 153-160. Tu Y Y, Xie X J. Growth inhibition of three cancer cells by theaflavin monomer[C]//Zhejiang Association for Science and Technology. Proceedings of the Zhejiang Provincial Biochemistry and Molecular Biology Academic Exchange Conference. [s.n.]: [s.n.], 2005: 153-160.

[15] Air pollution and lung cancer incidence in 17 European cohorts: prospective analyses from the European Study of Cohorts for Air Pollution Effects (ESCAPE) [J]. Lancet Oncology, 2013, 14(9): 813-822.

[16] Gupta P, Srivastava S K. Inhibition of HER2-integrin signaling by Cucurbitacin B leads toandbreast tumor growth suppression [J]. Oncotarget, 2014, 5(7): 1812-1828.

[17] 孙俊, 徐伟, 陆荣柱, 等. 姜黄素对人肝癌SMMC-7721细胞裸鼠移植瘤的抑制作用及其机制[J]. 江苏大学学报(医学版), 2022, 32(3): 219-225, 230. Sun J, Xu W, Lu R Z, et al. The inhibitory effect and mechanism of curcumin on human SMMC-7721 cells naked rat graft tumor [J]. Journal of Jiangsu University (Medical edition), 2022, 32(3): 219-225, 230.

[18] 方斌. 吉马酮抑制肝癌HepG2细胞增殖机制研究[D]. 武汉: 华中科技大学, 2013. Fang B. Mechanism of gemarone inhibiting HepG2 cell proliferation in HCC [D]. Wuhan: Huazhong University of Science and Technology, 2013.

[19] 邓鹏裔. 芝麻素对人肝癌细胞系HepG2的抑制作用及机理研究[D]. 武汉: 华中科技大学, 2013. Deng P Y. Inhibition effect and mechanism study of sesamin on HepG2 in the human HCC cell line [D]. Wuhan: Huazhong University of Science and Technology, 2013.

[20] 张超, 赵海建, 周伟燕, 等. 淫羊藿素调控miRNA-329和miRNA-1236抑制肝癌细胞增殖的机制研究[J]. 肿瘤研究与临床, 2021, 33(11): 805-810. Zhang C, Zhao H J, Zhou W Y, et al. The mechanism of regulating miRNA-329 and miRNA-1236 regulation in inhibiting HCC cell proliferation [J]. Oncology Research and Clinical, 2021, 33 (11): 805-810.

[21] 刘尊东, 魏恒云, 杨亚宗, 等. 褐藻多糖硫酸酯对肿瘤HepG2细胞EMT的影响[C]//中国药学会. 第十二届海洋药物学术年会会刊. [出版地不详]: [出版者不详], 2015: 97. Liu Z D, Wei H Y, Yang Y Z, et al. Effect of brown algae polysaccharide sulfate on EMT in tumor HepG2 cells [C]//Chinese Pharmaceutical Association. The 12th Annual Marine Medicine Academic Conference. [s.n.]: [s.n.], 2015: 97.

[22] W Y H, Kuraji R, Taya Y, et al. Effects of theaflavins on tissue inflammation and bone resorption on experimental periodontitis in rats [J]. Journal of Periodontal Research, 2018, 53(6): 1009-1019.

[23] Tanaka Y, Kirita M, Miyata S, et al. O-Methylated theaflavins suppress the intracellular a ccumulation of triglycerides from terminally differentiated human visceral adipocytes [J]. Journal of Agricultural & Food Chemistry, 2013, 61(51): 12634-12639.

[24] Fatima M, Kesharwani R K, Misra K, et al. Protective effect of theaflavin on erythrocytes subjected tooxidative stress [J]. Biochemistry Research International, 2013, 2013: 649759. doi: 10.1155/2013/649759.

[25] Tan Q Y, Peng L J, Huang Y Y, et al. Structure-activity relationship analysis on antioxidant and anticancer actions of theaflavins on human colon cancer cells [J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2018, 67(1): 159-170.

[26] 左灵妮, 刘康, 马晓勤, 等. 茶黄素通过调控miR-190表达对LPS诱导的结肠上皮细胞炎症损伤的影响[J]. 中国免疫学杂志, 2021, 37(17): 2087-2092. Zuo L N, Liu K, Ma X Q, et al. Effect of theaflavin on LPS-induced inflammatory damage in colon epithelial cells by regulating miR-190 expression [J]. Chinese Journal of Immunology, 2021, 37(17): 2087-2092.

[27] 曹亮. 胃肠癌非编码RNA调控TGF-信号通路新机制研究[D]. 郑州: 郑州大学, 2019. Cao L. New mechanism of TGF-signaling pathway regulation by noncoding RNA in gastrointestinal cancer [D]. Zhengzhou: Zhengzhou University, 2019.

[28] 钟永泷. KIF18A在肺腺癌中的生物学功能及作用机制研究[D]. 南宁: 广西大学, 2020. Zhong Y L. Biological function and action mechanism of KIF18A in lung adenocarcinoma [D]. Nanning: Guangxi University, 2020.

[29] Yamashita K, Sakuramoto S, Kikuchi S, et al. Laparoscopic versus open distal gastrectomy for early gastric cancer in Japan: long-term clinical outcomes of a randomized clinical trial [J]. Surgery Today, 2016, 46(6): 741-749.

[30] Suzuki H, Oda I, Abe S, et al. High rate of 5-year survival among patients with early gastric cancer undergoing curative endoscopic submucosal dissection [J]. Gastric Cancer, 2016, 19(1): 198-205.

Inhibitory Effect and Mechanism of Theaflavin (TF1) on Hepatoma Carcinoma Bel-7402 Cells

WANG Zhuan1, WEI Wujun2, REN Zhenzhen2, HE Zhilong1, FAN Yuchun3, ZHOU Jie3, GUO Guiyi4, JIANG Lihe1,2,3*

1. College of Light Industry and Food Engineering, Guangxi University, Nanning 530004, China; 2. School of Basic Medical Sciences, Youjiang Medical University for Nationalities, Baise 533000, China; 3. Medical College, Guangxi University, Nanning 530004, China; 4. Henan Key Laboratory of Tea Comprehensive Utilization in South Henan Xinyang Agriculture and Forestry University, Xinyang 464000, China

To explore the inhibitory effect and mechanism of theaflavin (TF1), human hepatoma carcinoma Bel-7402 cells were treated with different concentrations of TF1. Cell viability was detected by CCK8 and cell proliferation was detected by colony formation assay. Cell migration was detected by cell wound healing experiment and transwell chamber assay. Cell apoptosis was detected by flow cytometry. Apoptosis-related proteins (Bax, Bcl-2, PARP), migration related proteins (E-cad, N-cad, Vimentin, MMP9) and signaling pathway related proteins (TGF-, Smad3, p-smad3) were detected by western blot. The results show that different concentrations of TF1could inhibit the proliferation and migration of Bel-7402 cells and promote their apoptosis in a dose-dependent manner. The higher the dose, the stronger the inhibition effect (<0.05). Compared with the control group, the expression levels of Bax and E-cad proteins in the experimental group were higher, while the expression levels of Bcl-2, PARP, N-cad, Vimentin, MMP9, TGF-, Smad3 and p-smad3 were lower (<0.05). In conclusion, TF1could inhibit the proliferation and migration of Bel-7402 cells and promote their apoptosis through TGF-signaling pathway.

theaflavin,human hepatoma carcinoma cell,mechanism research

S517.1；
R735.2

A

1000-369X（2023）02-287-10

2022-07-26

2022-11-18

南宁市青秀区重点研发项目（2020023）、右江民族医学院高层次引进人才项目（YY2021sk02）、河南豫南茶叶综合利用重点实验室开放基金（HNKLTOF2018005）、福建省生态产业绿色技术重点实验室开放资金（WYKF2020-5）

王专，男，硕士研究生，主要从事食品营养学的研究。*通信作者：jianglihe@gxu.edu.cn

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