单侧湿性年龄相关性黄斑变性患者患眼黄斑区GCIPL厚度变化及其与血清IL-8水平的关系

张丽君，李翔威，谭晓慧

湿性年龄相关性黄斑变性（wet age-related macular degeneration，wetAMD）是50岁以上人群发生不可逆视力下降甚至致盲的主要原因之一，占年龄相关性黄斑变性（AMD）的10%~15%，主要包括传统的典型脉络膜新生血管（typical choroidal neovascularization，tCNV）、好发于亚洲人群的息肉样脉络膜血管病变（polypoidal choroidal vasculopathy，PCV）和好发于西方人群的隐匿性脉络膜新生血管3种类型［1-3］。虽然目前wetAMD的发病机制尚未完全阐明，但研究发现tCNV与PCV具有不同的病理生理学特征、视网膜损伤机制以及不同的治疗效果［4］。目前，有较多的观点认为wetAMD患者视功能损害的病理基础是视网膜神经节细胞凋亡及其轴索丢失，但不同的研究中关于wetAMD患者患眼神经节细胞-内丛状层（ganglion cell-inner plexiform layer，GCIPL）厚度改变的结论尚不一致，可能与未区分研究对象中的tCNV与PCV有关［5-7］。白细胞介素-8（interleukin-8，IL-8）是一种促炎症的CXC族趋化因子，在视网膜血管病变进程中发挥重要作用［8］。文献报道，血清IL-8水平升高与wetAMD发病相关，然而研究结果不尽相同［8-9］，且其与GCIPL厚度变化的关系国内外相关研究较少。因此，本研究分析了wetAMD患者GCIPL厚度变化及其与血清IL-8的关系，以期进一步明确GCIPL厚度在wetAMD发病中的临床意义。

1.1 研究对象 选取2019年1月—2022年3月在海南医学院第二附属医院确诊的单侧wetAMD患者（wetAMD组）120例，根据荧光素眼底血管造影（fluorescein fundus angiography，FFA）和吲哚菁绿血管造影（indocyanine green angiography，ICGA）检查结果将其分为单侧tCNV组（45例）和单侧PCV组（75例）。纳入标准：（1）年龄≥18岁。（2）诊断符合2018年英国国家卫生与临床优化研究所（NICE）发布的《年龄相关性黄斑变性诊断与治疗规范》中wetAMD诊断和分型标准［3］。（3）单侧首次发病，且未经相关治疗。（4）配合眼科检查，并且临床资料完整。排除标准：（1）患有wetAMD以外的其他眼部疾病。（2）有眼外伤史或曾接受过眼部手术者。（3）有类固醇、抗血管内皮生长因子治疗史者。（4）合并有急慢性感染和急性心脑血管疾病。（5）合并有精神疾病、自身免疫系统疾病、血液疾病、慢性器官衰竭、恶性肿瘤等疾病。另选取同期年龄、性别与wetAMD组患者匹配，并且眼部检查正常的门诊健康体检者75例（75眼）作为正常对照组。本研究遵循《赫尔辛基宣言》原则，通过了海南医学院第二附属医院伦理委员会的审核和批准（伦理号：LW2022047），受试者和（或）家属均被告知研究的目的与用途，并自愿签署书面知情同意书。

1.2 研究方法

1.2.1 一般资料收集 收集受试者的一般资料，包括性别、年龄、吸烟史、饮酒史、眼病史、高血压病史、糖尿病史、冠心病史、高脂血症、脑血管疾病等情况。

1.2.2 频域光学相干断层扫描术（optical coherence tomography，OCT）检查 所有受试者均接受了频域OCT检查，由经验丰富的检查员采用OCT扫描仪（海德堡公司，SPECTRALIS）对受试者受检眼黄斑区进行扫描，检测时调整好受试者与机器的距离，并指示受试者受检眼注视OCT扫描仪镜头内的固视点，扫描模式为512×128黄斑中心凹的水平线性扫描，轴向分辨率5μm，扫描速度2.6万次/s。通过三维成像识别视网膜神经纤维层外边界和黄斑内丛状层的外边界，并自动测量GCIPL厚度，记录平均、最小和6个区域测量（上方、鼻上、颞上、下方、鼻下和颞下）的GCIPL厚度。

1.2.3 实验室检查 所有受试者空腹8～10 h晨起抽取外周静脉血5 mL，并送至中心实验室，离心5 min（3 000 r/min），分离血清后保存于-70℃医用冰箱待测。采用酶联免疫吸附试验检测血清IL-8水平，试剂盒购自上海一研生物科技有限公司，检测步骤严格按照试剂盒说明书进行。

1.3 统计学方法 采用SPSS 26.0软件进行数据分析。符合正态分布的计量资料以均数±标准差（）表示，2组间比较采用独立样本t检验；
偏态分布的计量资料以［M（P25，P75）］表示，2组间比较采用非参数Mann-WhitneyU检验；
计数资料以频数或例（%）表示，2组间比较采用χ2检验。变量间的相关性采用Spearman相关分析。影响因素分析采用多因素Logistic回归分析。绘制受试者工作特征（ROC）曲线，通过ROC曲线下面积（AUC）评估诊断价值，并计算95%可信区间（CI）、截断值、敏感度、特异度和约登指数。P＜0.05为差异有统计学意义。

2.1 wetAMD组和对照组的一般资料、血清IL-8水平比较 2组受试者的性别、年龄、饮酒率以及伴高血压、冠心病、高脂血症和脑血管疾病比例比较差异均无统计学意义。wetAMD组吸烟比例、伴糖尿病比例和血清IL-8水平高于对照组（均P＜0.05），见表1。

2.2 wetAMD组和对照组GCIPL厚度比较 wetAMD组GCIPL厚度的平均值、最小值和6个区域测量值均明显小于对照组（均P＜0.01），见表2。

2.3 tCNV组和PCV组一般资料、血清IL-8水平比较 2组受试者性别分布、饮酒率以及伴高血压、冠心病、高脂血症和脑血管疾病比例比较差异均无统计学意义。tCNV组年龄、吸烟比例、伴糖尿病比例和血清IL-8水平高于PCV组（均P＜0.05），见表3。

2.4 tCNV组和PCV组GCIPL厚度比较 tCNV组GCIPL厚度的平均值、最小值、6个区域测量值均明显小于PCV组（均P＜0.01），见表4。

2.5 wetAMD患者血清IL-8水平与GCIPL厚度的相关性 Spearman相关分析结果显示，血清IL-8水平与GCIPL厚度的平均值、最小值及上方、鼻上方、颞上方、下方、鼻下方和颞下方测量值均呈显著负相关（rs分别为-0.567、-0.498、-0.567、-0.573、-0.505、-0.552、-0.554、-0.547，均P＜0.05）。

2.6 wetAMD发病的危险因素分析 以wetAMD组与对照组间比较差异有统计学意义的指标，包括吸烟（否＝0，是＝1）、糖尿病（否＝0，是＝1）、平均GCIPL厚度和血清IL-8为自变量，以是否发生wetAMD（否＝0，是＝1）为因变量，进行多因素Logistic回归分析。结果显示，吸烟、糖尿病、平均GCIPL厚度值降低和血清IL-8水平升高是wetAMD发病的危险因素，见表5。

2.7 wetAMD患者发生tCNV的危险因素分析 以PCV组与tCNV组间比较差异有统计学意义的指标，包括年龄、吸烟（否＝0，是＝1）、糖尿病（否＝0，是＝1）、平均GCIPL厚度和血清IL-8为自变量，以是否发生tCNV（否＝0，是＝1）为因变量，进行多因素Logistic回归分析。结果显示，糖尿病、平均GCIPL厚度值降低和血清IL-8水平升高是wetAMD患者发生tCNV的危险因素，见表6。

Tab.1 Comparison of general data and serum IL-8 level between the wetAMD group and the control group表1 wetAMD组和对照组一般资料、血清IL-8水平比较

Tab.2 Comparison of GCIPL thickness between the wetAMD group and the control group表2 wetAMD组与对照组GCIPL厚度比较 （μm

Tab.2 Comparison of GCIPL thickness between the wetAMD group and the control group表2 wetAMD组与对照组GCIPL厚度比较 （μm

＊＊P＜0.01。

组别对照组wetAMD组t n 75 120平均80.95±6.42 73.73±6.73 7.416＊＊最小76.83±8.18 69.18±10.14 5.504＊＊上方80.80±7.68 73.37±7.69 6.567＊＊鼻上方83.52±8.48 75.07±7.20 7.433＊＊颞上方79.92±5.87 73.53±7.71 6.146＊＊下方79.00±7.05 71.84±7.08 6.884＊＊鼻下方80.69±7.70 72.78±7.60 7.042＊＊颞下方81.95±6.63 74.60±7.17 7.168＊＊

Tab.3 Comparison of general data and serum IL-8 level between the tCNV group and the PCV group表3 tCNV组和PCV组一般资料、血清IL-8水平比较

Tab.4 Comparison of GCIPL thickness between the tCNV group and the PCV group表4 tCNV组和PCV组GCIPL厚度比较 （μm

Tab.4 Comparison of GCIPL thickness between the tCNV group and the PCV group表4 tCNV组和PCV组GCIPL厚度比较 （μm

＊＊P＜0.01。

组别PCV组tCNV组t n 75 45平均76.06±6.26 69.85±5.63 5.460＊＊最小71.90±9.66 64.65±9.35 4.028＊＊上方76.27±6.59 68.55±6.98 6.078＊＊鼻上方77.26±6.68 71.44±6.61 4.636＊＊颞上方75.75±7.31 69.84±6.96 4.368＊＊下方73.80±7.24 68.58±5.47 4.170＊＊鼻下方74.59±7.97 69.76±5.86 3.535＊＊颞下方76.77±7.07 70.98±5.77 4.644＊＊

Tab.5 Analysis of risk factors for wetAMD表5 wetAMD发病的危险因素分析

Tab.6 Analysis of risk factors for tCNV in patients with wetAMD表6 wetAMD患者发生tCNV的危险因素分析

2.8 平均GCIPL厚度对wetAMD和tCNV的诊断价值 平均GCIPL厚度诊断wetAMD和tCNV的AUC分别为0.775（95%CI：0.710~0.832）和0.765（95%CI：0.678~0.837）。当临界值为75.60μm时，平均GCIPL厚度诊断wetAMD的敏感度、特异度和约登指数分别为63.33%、81.33%、0.447；
当临界值为70.20μm时，平均GCIPL厚度诊断tCNV的敏感度、特异度和约登指数分别为64.44%、82.62%、0.471，见图1、2。

AMD是一种以视网膜细胞进行性凋亡为主要特征的神经退行性变性疾病，随着视网膜色素上皮细胞逐渐丧失，导致光感受器功能损伤，并最终出现不可逆性中央视野缺损和视力下降［1-2］。尽管wetAMD的发病率低于干性AMD，但其在AMD所致的严重视力下降中占90%，并且其可因脉络膜新生血管的发展而导致法定盲，严重影响中老年人的健康和生活质量［10］。PCV、tCNV是我国中老年人群wetAMD发病的2种主要形式［3］。此外，据调查发现初诊为tCNV的患者中至少50%为PCV［11］。因此，寻找早期诊断wetAMD和鉴别tCNV与PCV的有效工具有重要的临床意义。

Fig.2 Analysis of diagnostic value of mean GCIPL thickness for tCNV图2 平均GCIPL厚度对tCNV的诊断价值分析

虽然目前wetAMD发病机制尚未完全明确，有较多的观点认为wetAMD主要涉及视网膜的外层，由于该区域的脂蛋白在Bruch膜中积聚而形成玻璃膜疣，并通过有毒中间产物损伤视网膜色素上皮细胞和诱发其凋亡等机制，导致光感受器丧失、视功能下降和外核层变薄［1-3］。另有研究显示，在早期wetAMD中，视网膜内层也会受到累及，并可能通过跨神经元变性诱发神经元凋亡机制，导致GCIPL厚度变薄，参与wetAMD的发生、发展［7］。近年来，频域OCT检查技术的普及更有利于准确观察视网膜各层形态结构的变化，其中通过测量GCIPL厚度为视网膜病变的诊断提供了性能较好的辅助工具［12］。本研究结果显示，wetAMD患者患眼GCIPL厚度异常变薄，尤其以tCNV患者更为明显，并且多因素Logistic回归分析结果也显示，经调整其他影响因素后，GCIPL厚度值下降与wetAMD、tCNV发病有关，证实了GCIPL厚度异常变薄参与了wetAMD的疾病进展，这与一些研究［13-14］的结果相近。

IL-8是趋化因子CXC亚家族成员之一，主要由巨噬细胞、血管内皮细胞和视网膜色素上皮细胞表达，并通过与其特异性受体结合，调节人体生理和病理过程，同时也是通过促进中性粒细胞趋化和脱颗粒参与机体炎症与免疫反应的重要介质［15］。Roshanipour等［16］研究表明，IL-8及其受体基因单核苷酸多态性增加AMD发病风险，其中部分单核苷酸多态性基因型与血清IL-8水平升高相关。研究发现，wetAMD患者不仅患眼房水中IL-8异常高表达，而且血清IL-8水平也异常升高，并影响抗血管内皮生长因子药物治疗效果［8-9］。但另一些研究认为，AMD患者血清IL-8水平与正常对照人群相比差异并不明显［17-18］。以上研究结果的差异可能与研究对象中未区分tCNV与PCV有关。本研究结果显示，wetAMD患者血清中IL-8水平较对照组升高，tCNV患者血清中IL-8水平也较PCV患者升高，并且为wetAMD发病和发生tCNV的危险因素，与Lechner等［8］研究结果一致，提示血清中IL-8参与了wetAMD的发生和发展。其中机制可能与以下几方面有关：（1）氧化应激和炎症反应可能在wetAMD的发病机制中发挥着重要作用，IL-8作为一种重要的趋化性细胞因子和促血管生成因子，可由玻璃疣或其成分诱导下在巨噬细胞和视网膜细胞中高表达和大量释放，并诱发血管通透性升高、血视网膜屏障的破坏以及循环系统中炎性细胞因子的激活［8-9］。（2）既往研究表明，wetAMD患者血循环中性粒细胞异常高表达，并迁移进入眼睛，导致视网膜损伤，而IL-8是中性粒细胞的强趋化因子，高水平的血循环IL-8可能有助于wetAMD患者血循环中性粒细胞的增加和迁移，从而促进wetAMD发生、发展［19］。此外，本研究也发现，wetAMD患者血清IL-8水平与GCIPL厚度呈显著负相关。由此可见，血液循环中高水平的IL-8还可通过促进炎症反应向内核层迁移并损伤黄斑区神经节细胞-内丛状层结构和诱发视网膜神经细胞变性与凋亡，导致GCIPL厚度变薄，从而促进wetAMD的发生和发展［8-9，13］。但也有研究表明，wetAMD与血清肿瘤坏死因子-α、IL-6、IL-8等细胞因子水平的相关性要弱于房水或玻璃体中各细胞因子水平与疾病的相关性［20］。本研究作为横断面调查只能证明wetAMD与血清IL-8水平存在一定相关性，后者是否为wetAMD发病的独立危险因素，还需大量调查或实验进一步确定。

wetAMD尤其是tCNV可导致中老年患者视力下降甚至导致法定盲，严重影响其健康和生活质量。虽然目前对于wetAMD尚缺乏有效的治疗方法，但在wetAMD早期进行干预则有望保护患者的视功能和改善预后。因此，对wetAMD发病高危人群需定期进行FFA和ICGA检查，但这些检查为有创操作，作为筛查手段存在局限性和适用范围。本研究ROC分析结果显示，平均GCIPL厚度诊断wetAMD和tCNV的特异度较高，提示平均GCIPL厚度可作为排除wetAMD疑似病例和区分tCNV与PCV的可靠指标，有助于wetAMD和tCNV的早期筛查。

综上所述，wetAMD患者患眼GCIPL厚度异常变薄与wetAMD发病和tCNV发生有关，高表达的血清IL-8可能通过诱发视网膜神经细胞变性和凋亡等途径促进GCIPL厚度异常变薄，并导致wetAMD的发生和发展。平均GCIPL厚度诊断wetAMD和tCNV的特异度较高，可作为临床诊断wetAMD和tCNV时的辅助工具。但是由于本研究为单中心研究，并且纳入单侧tCNV患者的样本量相对偏小，不能排除存在选择偏倚，有待多中心、大样本研究进一步验证。

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